TNF-R1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-423442-NIC-2
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TNF-R1O plasmídeo de dupla Nickase (m2) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase TNF-R1 (m2) e o Plasmídeo Double Nickase TNF-R1 (m22) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Tnfrsf1a. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TNF-R1 Anticorpo (H-5): sc-8436
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TNF-R1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-423442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene murino Tnfrsf1a codifica o receptor 1 do fator de necrose tumoral (TNF‑R1), um receptor de TNF expresso de forma ubíqua que se liga ao TNF e inicia a transdução de sinais que controla a inflamação, a sobrevivência celular e a morte celular programada. Após o engajamento do ligante, o TNF‑R1 monta complexos de sinalização na membrana e no citosol que regulam a ativação de NF‑κB e MAPK, bem como a apoptose dependente de caspases e a necroptose mediada por RIPK, conectando sinais da imunidade inata a vias transcricionais e de morte celular. A desregulação da sinalização do TNF‑R1 está implicada na fisiopatologia inflamatória e autoimune, em processos neuroinflamatórios e em respostas a lesão tecidual, tornando o Tnfrsf1a um nó central para o estudo da homeostase impulsionada por citocinas. A edição gênica de Tnfrsf1a em modelos murinos permite a investigação mecanística de redes de sinalização do TNF, da função de domínios do receptor e das contribuições específicas de tipos celulares para fenótipos de doenças mediadas pelo sistema imune.
TNF-R1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Tnfrsf1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Tnfrsf1a. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Tnfrsf1a. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Tnfrsf1a interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.