TMEM175 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413613

概要

TMEM175は、リソソームおよび後期エンドソームに局在する膜貫通チャネルをコードしており、オルガネラ内のイオン恒常性と内腔pHの安定化を支えます。リソソーム機能を調節することで、TMEM175はオートファジーフラックス、エンドリソソーム輸送、ならびにタンパク質や損傷オルガネラの分解を担うプロテオスタシス経路に影響を及ぼします。TMEM175活性の変化は、リソソーム依存的なクリアランスの破綻や細胞ストレス応答の異常と関連づけられており、この遺伝子が神経変性に関わる機序と結び付くことが示されています。そのためTMEM175は、リソソーム生物学、ミトコンドリア品質管理とのクロストーク、炎症や代謝適応を調節する経路の文脈で研究されています。

TMEM175 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM175遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM175内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM175のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM175タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM175シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM175欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM175の機能に不可欠なTMEM175エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM175ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM175 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM175 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM175遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM175 HDRプラスミド（h）および TMEM175 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM175ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM175標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。