TLX3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405569-ACT

TLX3 (T-cell leukemia homeobox 3) é um fator de transcrição homeobox que regula programas de expressão gênica dependentes do contexto durante o desenvolvimento e a especificação de linhagens, com papéis de destaque na diferenciação hematopoética e neuronal. Ao se ligar a motivos específicos de DNA por meio do seu homeodomínio, o TLX3 pode reorganizar redes transcricionais que influenciam decisões de destino celular, o controle da proliferação e o estado de maturação. A expressão desregulada de TLX3 está associada a programas de diferenciação alterados e a sinalização transcricional aberrante observados em modelos de neoplasias hematológicas, tornando-o um nó útil para estudar a biologia de fatores de transcrição oncogênicos. Em sistemas celulares, a perturbação de TLX3 é comumente investigada para mapear genes-alvo a jusante, estados epigenéticos e o crosstalk entre vias que governam fenótipos relevantes para o desenvolvimento e para doenças.

TLX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLX3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLX3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLX3 em células tumorais com expressão de TLX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.