TLR6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401996-ACT

O TLR6 humano codifica um receptor do tipo Toll que atua como receptor de reconhecimento de padrões na imunidade inata, mais proeminentemente como um heterodímero com o TLR2 para detectar lipoproteínas diaciladas de bactérias e outros produtos microbianos. A ligação do ligante ativa cascatas de sinalização dependentes de MyD88 que convergem para as vias de NF-κB e MAPK, promovendo programas de transcrição que moldam a produção de citocinas e quimiocinas e coordenam respostas inflamatórias precoces. A atividade do TLR6 influencia a maturação de células apresentadoras de antígeno e a comunicação entre a imunidade inata e a adaptativa por meio da modulação de sinais coestimuladores e de redes gênicas associadas ao interferon. A desregulação da sinalização de TLR6 tem sido implicada na suscetibilidade a infecções e em estados inflamatórios crônicos, sendo frequentemente estudada no contexto de inflamação das vias aéreas, inflamação metabólica e fenótipos imunes associados ao microbioma.

TLR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLR6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLR6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLR6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLR6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLR6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLR6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLR6 em células tumorais com expressão de TLR6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.