TLE1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400343-ACT

TLE1 (enhancer semelhante à transducina de split 1) é um correpressor transcricional da família Groucho/TLE que modula a expressão gênica ao interagir com fatores de transcrição ligantes de DNA e recrutar complexos modificadores de cromatina. É mais conhecido por moldar programas de desenvolvimento e de especificação de linhagens por meio da repressão de genes-alvo da via Wnt/β-catenina e de interações (crosstalk) com Notch, TGF-β e outras vias associadas à diferenciação. Ao influenciar o estado da cromatina e a saída transcricional, o TLE1 contribui para o controle da proliferação, decisões de destino celular e a homeostase tecidual. A expressão desregulada de TLE1 ou o contexto de sinalização em que atua está implicado em programas transcricionais oncogênicos e é amplamente estudado como marcador molecular e nó regulatório na biologia do câncer.

TLE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLE1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLE1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLE1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLE1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLE1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLE1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLE1 em células tumorais com expressão de TLE1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.