TIRAPCRISPR激活质粒(h): sc-402650-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TIRAP CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- TIRAP CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 TIRAP CRISPR 激活质粒 (h) 和 TIRAP CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 TIRAP 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：TIRAP: sc-166149，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TIRAPCRISPR激活质粒(h) | sc-402650-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 TIRAP（亦称 MAL）编码一种衔接蛋白，可将 Toll 样受体（TLR），尤其是 TLR2 和 TLR4，与先天免疫中的下游信号级联反应耦联起来。TIRAP 通过连接受体近端复合物与 MyD88 依赖性信号，促进 NF-κB 和 MAPK 通路的激活，并塑造炎性细胞因子与趋化因子表达程序。其调控会影响抗微生物反应、免疫细胞活化以及与干扰素相关网络的串扰。TIRAP 信号失衡与炎症性及感染性疾病的易感性相关，并常因其对肿瘤相关炎症和免疫逃逸机制的影响而被研究。
TIRAP CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TIRAP的表达。
TIRAP CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TIRAP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TIRAP转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TIRAP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TIRAP位点，并能够研究内源性位点上依赖于TIRAP的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TIRAP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TIRAP通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。