Plasmide Double Nickase (h) Timeless: sc-404555-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Timeless correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Timeless Double Nickase (h) et le plasmide Timeless Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TIMELESS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Timeless Antibody (A-3): sc-393122
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Timeless | sc-404555-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Timeless | sc-404555-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TIMELESS humain code Timeless, un facteur conservé associé à la fourche de réplication qui coordonne la réplication de l’ADN avec le contrôle circadien et le cycle cellulaire. Timeless forme des complexes avec TIPIN et d’autres composants du replisome afin de stabiliser les fourches bloquées, de réguler le point de contrôle ATR–CHK1 et de limiter le stress réplicatif en favorisant une reprise correcte des fourches et la progression en phase S. Par ces fonctions, il influence l’intégrité du génome, la dynamique de la chromatine et les réponses aux dommages de l’ADN. Une dérégulation de TIMELESS a été associée dans la littérature à une altération de la signalisation des points de contrôle et à des phénotypes d’instabilité génomique, couramment étudiés en biologie du cancer et dans des modèles de recherche sur la réponse au stress.
Timeless Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TIMELESS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TIMELESS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TIMELESS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TIMELESS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.