Timeless Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404555-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TimelessO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Timeless (h) e o Plasmídeo Double Nickase Timeless (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para TIMELESS. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Timeless Anticorpo (A-3): sc-393122
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Timeless Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404555-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Timeless Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404555-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TIMELESS humano codifica a proteína Timeless, um fator conservado associado à forquilha de replicação que coordena a replicação do DNA com o controlo circadiano e do ciclo celular. Timeless forma complexos com TIPIN e outros componentes do replissoma para estabilizar forquilhas estagnadas, regular o checkpoint ATR–CHK1 e limitar o stress de replicação, promovendo o reinício adequado da forquilha e a progressão da fase S. Através destas funções, influencia a integridade do genoma, a dinâmica da cromatina e as respostas a danos no DNA. A desregulação de TIMELESS tem sido associada, na literatura, a alterações na sinalização de checkpoints e a fenótipos de instabilidade genómica, frequentemente investigados em biologia do cancro e em modelos de pesquisa de resposta ao stress.
Timeless O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TIMELESS em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TIMELESS. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TIMELESS. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TIMELESS interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.