TIF1β CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401999-ACT

TRIM28（TIF1β［KAP1］とも呼ばれる）は、KRAB関連転写コリプレッサーであり、SETDB1やNuRD/HDAC複合体などのクロマチン修飾因子をリクルートして、H3K9me3で標識されたヘテロクロマチンを形成することで、エピジェネティックな遺伝子サイレンシングを協調的に制御する。転移因子の制御、ゲノム安定性、DNA損傷応答、ならびに転写プログラムの広範な制御を通じた細胞アイデンティティの維持において中心的な役割を担う。TRIM28依存的な抑制は、クロマチン構造の組織化、ユビキチン介在性シグナル伝達、発生過程の転写ネットワークを制御する経路と連動している。TRIM28/TIF1β活性の破綻は、分化状態の変化や異常な転写抑制と関連づけられており、がんにおけるエピジェネティック・リモデリングや神経発達に関わる表現型など、複数の疾患関連コンテクストで観察されている。

TIF1β CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIM28の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TIF1β CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRIM28 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIM28転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TIF1βの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIM28遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTIF1β依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIM28発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTIF1β経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。