Tie-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400295-ACT

TEK kodiert die endotheliale Rezeptor-Tyrosinkinase Tie-2, einen zentralen Regulator der Gefäßentwicklung und -erhaltung, der Angiopoietin-Signale integriert und so das Überleben und die Migration von Endothelzellen sowie die Integrität der Endothelbarriere steuert. Die Tie-2-Aktivität koordiniert nachgeschaltete PI3K/AKT- und MAPK-Signalwege und steht in Wechselwirkung mit VEGF-getriebenen angiogenen Programmen, die das Gefäß-Remodeling und den Ruhezustand (Quieszenz) mitprägen. Eine fehlregulierte TEK/Tie-2-Signalübertragung wird mit pathologischer Angiogenese, vaskulären Malformationen, entzündungsassoziierter endothelialer Dysfunktion und vaskulärem Remodeling in der Tumormikroumgebung in Verbindung gebracht. Daher wird TEK intensiv in der Endothelbiologie, der Gefäßpermeabilität und stromalen Signalnetzwerken untersucht, die für die kardiovaskuläre Forschung und die Krebsforschung relevant sind.

Tie-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TEK-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Tie-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TEK-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TEK-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Tie-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TEK-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Tie-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Tie-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TEK-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.