Tie-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400295-ACT

TEKは、内皮細胞受容体型チロシンキナーゼであるTie-2をコードしており、血管の発生と維持を制御する主要な調節因子です。Tie-2はアンジオポエチンのシグナル伝達を統合し、内皮細胞の生存、遊走、ならびにバリア機能の維持を調節します。Tie-2の活性は下流のPI3K/AKT経路およびMAPK経路を協調的に制御し、さらにVEGF依存性の血管新生プログラムともクロストークすることで、血管のリモデリングや静止状態（クワイエッセンス）の形成に関与します。TEK/Tie-2シグナルの破綻は、病的血管新生、血管奇形、炎症に関連した内皮機能障害、ならびに腫瘍微小環境における血管リモデリングと関連づけられています。そのためTEKは、心血管研究およびがん研究に関連する内皮生物学、血管透過性、間質（ストローマ）シグナルネットワークの分野で広く研究されています。

Tie-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TEKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tie-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TEK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTEK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tie-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTEK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTie-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTEK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTie-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。