TIA-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400212-ACT

TIA1 codifica a TIA-1, uma proteína de ligação a RNA que reconhece sequências ricas em U e coordena a regulação pós-transcricional de genes por meio de splicing alternativo, estabilização de mRNA e repressão translacional. A TIA-1 é um componente-chave dos grânulos de estresse e conecta as respostas celulares ao estresse a alterações no destino dos transcritos, influenciando processos como apoptose, sinalização imune inata e expressão de genes inflamatórios. Devido às suas funções no metabolismo de RNA e em programas adaptativos ao estresse, alterações na atividade da TIA-1 têm sido associadas à desregulação de vias de citocinas e ao processamento aberrante de RNA observado em contextos de pesquisa em câncer e neurodegeneração. Essas funções tornam o TIA1 um alvo útil para estudar como a sinalização de estresse remodela redes de expressão gênica no nível de RNA.

TIA-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TIA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIA-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TIA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TIA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIA-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TIA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIA-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIA-1 em células tumorais com expressão de TIA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.