Plasmide CRISPR/Cas9 KO THP (m): sc-423607

Présentation

Umod code la protéine de Tamm–Horsfall (THP, uromoduline), la glycoprotéine sécrétée la plus abondante dans l’urine des mammifères, produite par les cellules épithéliales de la branche ascendante épaisse de l’anse de Henle et du début du tubule distal. La THP est libérée dans la lumière tubulaire, où elle contribue à l’homéostasie épithéliale, module la gestion des ions via des interactions avec des processus de transport tels que la réabsorption de NaCl dépendante de NKCC2, et participe à l’organisation des réseaux protéiques urinaires par la formation de polymères. Par ses effets sur les réponses au stress tubulaire, la signalisation de l’immunité innée et les programmes de différenciation épithéliale, l’activité d’UMOD influence la physiologie rénale et la susceptibilité aux lésions tubulo-interstitielles. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de Umod sont associées à des phénotypes de maladie rénale, notamment la néphropathie liée à l’uromoduline, des traits associés à l’hyperuricémie et un risque accru de maladie rénale chronique, ce qui en fait un locus clé pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO THP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Umod dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Umod, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Umod à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine THP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Umod pour l'étude de la signalisation de THP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Umod essentiels à la fonction de THP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Umod pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le THP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le THP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Umod. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le THP plasmide HDR (m) et le THP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Umod pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Umod définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.