THP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423607

概要

UmodはTamm–Horsfallタンパク質（THP、ウロモジュリン）をコードしている。THPは哺乳類の尿中に分泌される糖タンパク質の中で最も豊富なもので、ヘンレ係蹄太い上行脚および遠位尿細管初期部の上皮細胞で産生される。THPは尿細管腔内に放出され、上皮の恒常性維持に寄与するとともに、NKCC2依存性のNaCl再吸収などの輸送過程との相互作用を介してイオン輸送を調節し、さらにポリマー形成によって尿中タンパク質ネットワークの構築にも関与する。尿細管ストレス応答、自然免疫シグナル、上皮分化プログラムへの作用を通じて、UMOD活性は腎臓の生理機能や尿細管間質傷害への感受性に影響を与える。Umodの遺伝学的・機能的な攪乱は、ウロモジュリン関連腎疾患、高尿酸血症に関連する形質、慢性腎臓病リスクなどの腎疾患表現型と関連しており、マウスモデルにおける機序研究の重要な標的遺伝子座となっている。

THP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUmod遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Umod内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Umodのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、THPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、THPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Umod欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• THPの機能に不可欠なUmodエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Umodゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• THP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTHP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Umod遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  THP HDRプラスミド（m）および THP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUmodホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUmod標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。