TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423371-NIC

マウスの **Tgfbr2** は、TGFβリガンドに結合し、TGFBR1をリン酸化してカノニカルなSMAD2/3シグナル伝達を開始する膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼである **TGFβ受容体2（TGFBR2）** をコードする。この経路は、状況依存的に細胞周期制御、分化、上皮間葉転換（EMT）、細胞外マトリックスのリモデリングを統合的に制御し、さらにMAPK、PI3K–AKT、RHO GTPaseシグナルとも連携する。生物医学研究では、TGFBR2活性の変化は、組織恒常性の破綻、免疫調節、線維化リモデリングの異常に加え、がん生物学や発生における経路の再配線（rewiring）や表現型をモデル化する目的で広く用いられている。TGFBR2はTGFβシグナル伝達の最上流に位置するため、Tgfbr2を撹乱することは、下流の転写プログラムやリガンド依存的フィードバック回路を解析するための直接的な手段となる。

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Tgfbr2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tgfbr2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tgfbr2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tgfbr2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。