Plasmide CRISPR/Cas9 KO TGase2 (m): sc-423375

Présentation

Le gène murin **Tgm2** code la transglutaminase 2 (TGase2), une enzyme multifonctionnelle dépendante du Ca2+ qui catalyse la réticulation des protéines, la désamidation et la polyamination, tout en présentant également des activités de liaison au GTP et de protéine échafaudage. TGase2 régule le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhérence et la migration cellulaires, l’apoptose et la signalisation inflammatoire, en interagissant avec des voies telles que NF-κB, TGF-β, l’axe intégrine/FAK et les programmes de cicatrisation. Son activité influence la dynamique du cytosquelette et la rigidité de la matrice, reliant **Tgm2** au remodelage fibrotique et aux réponses de réparation tissulaire. Une dérégulation de la fonction de TGase2 a été associée, dans des modèles précliniques, à la neuroinflammation, à l’adaptation au stress métabolique et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui motive des études mécanistiques dans des types cellulaires murins pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TGase2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tgm2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tgm2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tgm2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TGase2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tgm2 pour l'étude de la signalisation de TGase2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tgm2 essentiels à la fonction de TGase2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tgm2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TGase2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TGase2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tgm2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TGase2 plasmide HDR (m) et le TGase2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tgm2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tgm2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.