TFPI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417987

概要

TFPI2 は、細胞外マトリックス内における細胞周囲のプロテオリシスを調節する、分泌型の Kunitz 型セリンプロテアーゼ阻害因子である tissue factor pathway inhibitor 2（TFPI-2）をコードします。マトリックス再構築や凝固関連のプロテアーゼ活性に関与する酵素を阻害することで、TFPI-2 は細胞接着、遊走、浸潤、および組織恒常性に影響を与えます。TFPI-2 の活性は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）の制御やトロンビン関連シグナルに結び付いた細胞外プロテアーゼネットワークと交差し、腫瘍微小環境や血管系の文脈において、プロテオリシスの活性化と抑制のバランス形成に関与します。TFPI2 の発現異常は、複数の疾患関連モデルにおいて、細胞外マトリックスのターンオーバー異常や浸潤表現型の変化と関連付けられており、転移関連プロセスの研究における機構的な結節点としての有用性が示唆されています。

TFPI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTFPI2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TFPI2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TFPI2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TFPI-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TFPI-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TFPI2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TFPI-2の機能に不可欠なTFPI2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TFPI2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TFPI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTFPI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TFPI2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TFPI-2 HDRプラスミド（h）および TFPI-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTFPI2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTFPI2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。