TFII-I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403153-ACT

GTF2I codifica a TFII-I, um fator de transcrição multifuncional que se liga a elementos iniciadores e semelhantes a E-box para integrar sinais proximais a receptores com programas de expressão gênica dependentes da RNA polimerase II. A TFII-I participa de redes de sinalização de fatores de crescimento e do sistema imune, modulando vias ligadas à atividade MAPK/ERK, à transcrição dependente de cálcio e à regulação da cromatina responsiva a estímulos. Por meio de seus papéis no controle da proliferação, diferenciação e respostas ao estresse, a TFII-I tem sido estudada no contexto de fenótipos do neurodesenvolvimento e de desregulação imune, incluindo alterações genômicas sensíveis à dosagem em 7q11.23. A regulação alterada de GTF2I também oferece um ponto de entrada mecanístico para investigar a reprogramação transcricional em sinalização associada ao câncer e transições de estado celular.

TFII-I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GTF2I sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TFII-I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GTF2I em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GTF2I, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TFII-I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GTF2I nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TFII-I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TFII-I em células tumorais com expressão de GTF2I silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.