tetranectin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423429

概要

マウスのClec3bは、細胞外液およびマトリックス関連コンパートメントに存在する分泌型C型レクチン様タンパク質であるテトラネクチンをコードします。テトラネクチンはプラスミノーゲンに結合し、細胞周囲のタンパク質分解、線溶、ならびに細胞外マトリックス（ECM）リモデリングの制御に関与するとされており、これらのプロセスは細胞移動や組織修復に影響します。プロテアーゼ系やマトリックス成分との相互作用を通じて、テトラネクチンは炎症性および間質性の微小環境を調節し得ることから、腫瘍浸潤、創傷治癒、線維化リモデリングの文脈で研究されてきました。複数の疾患状況においてCLEC3Bの発現量やタンパク質量の変化が報告されており、タンパク質分解のバランスやマトリックス動態を検討するための機構的な要所（ノード）としての有用性が支持されています。

tetranectin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるClec3b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Clec3b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Clec3bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、tetranectinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、tetranectinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Clec3b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• tetranectinの機能に不可欠なClec3bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Clec3bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• tetranectin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびtetranectin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Clec3b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  tetranectin HDRプラスミド（m）および tetranectin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはClec3bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のClec3b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。