TDAG8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416613
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TDAG8 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TDAG8, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TDAG8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-416613 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
GPR65 codifica o TDAG8, um recetor acoplado à proteína G sensível a protões, que deteta a acidificação extracelular e transduz sinais através de cAMP/PKA e de programas transcricionais a jusante. O TDAG8 é enriquecido em contextos imunes e hematopoiéticos, onde modula respostas inflamatórias, quimiotaxia e sobrevivência celular em microambientes ácidos. Ao acoplar o pH extracelular à sinalização por GPCR, o TDAG8 influencia vias de resposta ao stress e redes de citocinas relevantes para a inflamação tecidular e para a acidose associada a tumores. Alterações na atividade de GPR65 têm sido estudadas em relação à desregulação imunitária e a fenótipos impulsionados pelo microambiente, sustentando a sua utilização como um nó mecanístico na biologia dos GPCR e na deteção de pH.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TDAG8 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GPR65 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GPR65, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GPR65 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TDAG8.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GPR65 para a investigação da sinalização de TDAG8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GPR65 críticos para a função TDAG8
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GPR65 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TDAG8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TDAG8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GPR65. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TDAG8 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TDAG8 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GPR65 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GPR65 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.