TAP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405210-NIC

TAP1（transporter associated with antigen processing 1）は、ATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードしており、TAP2とヘテロ二量体を形成して、プロテアソーム由来ペプチドを細胞質から小胞体へ輸送し、MHCクラスI分子への搭載を可能にします。この過程は抗原処理・提示の中核をなしており、インターフェロン刺激シグナル、免疫プロテアソーム活性、ならびに小胞体におけるペプチド搭載複合体（ER peptide-loading complex）の機能を、CD8陽性T細胞による免疫監視へと結び付けます。TAP1の発現や機能の変化は、MHC Iの細胞表面提示の低下や、複数の腫瘍で観察される免疫回避表現型と関連し、また稀な抗原提示異常では原発性免疫不全様の所見とも関連します。そのためTAP1は、宿主―病原体相互作用、腫瘍免疫、そしてMHC Iの組み立てや輸送を制御する機構に関わる経路の研究で、しばしば解析対象となります。

TAP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TAP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TAP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TAP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TAP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。