Tak1L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406747-ACT

MAP3K7CL codifica Tak1L, una proteina simile a una MAP chinasi chinasi chinasi, correlata al modulo di segnalazione TAK1/MAP3K7 che collega segnali a monte a cascate chinasi a valle. Le proteine di questo asse sono comunemente associate alla regolazione delle vie NF-κB e MAPK, influenzando la segnalazione infiammatoria, le risposte allo stress e il controllo, dipendente dal contesto, di programmi trascrizionali. Sebbene MAP3K7CL sia meno caratterizzata rispetto al TAK1 canonico, la sua somiglianza con i membri della famiglia MAP3K la rende rilevante per studiare l’architettura delle reti di chinasi, la ridondanza di via e la segnalazione compensatoria. La disregolazione della segnalazione associata a TAK1 è implicata in fenotipi immuni e infiammatori e in stati di segnalazione associati al cancro, a supporto di studi esplorativi della funzione di MAP3K7CL in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Tak1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP3K7CL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tak1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP3K7CL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP3K7CL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tak1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP3K7CL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tak1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tak1L nelle cellule tumorali con espressione di MAP3K7CL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.