Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Tak1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-424044-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Tak1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Tak1ダブルニカースプラスミド（m）およびTak1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Map3k7を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Tak1 抗体 (C-9): sc-7967
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Tak1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-424044-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスMap3k7はTAK1（TGF-β活性化キナーゼ1）をコードしており、炎症性サイトカインおよびパターン認識受容体からのシグナルを統合して、ストレス応答性の転写プログラムを制御するMAP3Kである。TAK1は、TABタンパク質やTRAF複合体などの上流アダプターからNF-κB、JNK、p38 MAPK経路の活性化へとつなぐ中心的なハブであり、自然免疫シグナル、細胞生存、アポトーシス、分化を調節する。実験モデルでは、Map3k7の改変により炎症応答、上皮および間質の恒常性、組織リモデリングが再編されるため、免疫調節異常、線維化、腫瘍性シグナル伝達の文脈における研究に関連が深い。さらに、この経路上の位置づけから、TGF-β、TNF、IL-1、TLRの各シグナルモジュール間のクロストークを解明するうえでも有用である。
Tak1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Map3k7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Map3k7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Map3k7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Map3k7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。