Tak1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400364-ACT

O MAP3K7 humano codifica a quinase 1 ativada por TGF-β (TAK1), uma MAP3K que integra sinais de citocinas pró-inflamatórias, de receptores Toll-like e de IL-1, e de ligantes da família do TGF-β. A TAK1 ativa, a jusante, as cascatas de NF-κB e MAPK, incluindo as vias p38, JNK e ERK, regulando assim programas transcricionais que controlam respostas imunes inatas, apoptose e adaptação ao estresse. Por meio de seus papéis em complexos de sinalização dependentes de ubiquitina e em eventos de fosforilação mediados por quinases, a TAK1 influencia decisões de destino celular em diversos contextos teciduais. A desregulação da sinalização MAP3K7/TAK1 tem sido implicada na fisiopatologia inflamatória e em processos oncogênicos, nos quais a atividade alterada de NF-κB/MAPK remodela redes de sobrevivência e de citocinas.

Tak1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tak1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tak1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tak1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tak1 em células tumorais com expressão de MAP3K7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.