T-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-416752-ACT-2

O CDH13 humano codifica a T-caderina (caderina-13), uma caderina atípica ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI), que não possui domínios transmembrana e citoplasmático e atua como moduladora da adesão e da sinalização na superfície celular. A T-caderina influencia as interações célula–célula, o crescimento de neuritos e a organização sináptica, bem como o comportamento vascular/endotelial, integrando sinais que afetam a remodelação do citoesqueleto e vias de sinalização dependentes de contato. Variações em CDH13 e alterações em sua expressão têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, assim como a características cardiometabólicas e vasculares, reforçando sua relevância para estudos de conectividade cerebral e disfunção endotelial. A edição gênica de CDH13 permite a dissecação mecanística da sinalização mediada por caderinas independentemente de adesão, o mapeamento dos efeitos de variantes sobre a localização e a função da proteína e o desenvolvimento de modelos celulares para análise de vias e investigação de genótipo–fenótipo.

T-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

T-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de T-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de T-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via T-cadherin em células tumorais com expressão de CDH13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.