Tβ-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422497

概要

Tmsb4xは、チモシンβ-4（Tβ-4）をコードしている。Tβ-4は高度に保存されたアクチン隔離ペプチドで、G-アクチンの利用可能量を調節し、細胞骨格の動的な再構築を支える。マウス細胞では、Tβ-4はアクチン重合の調節や、フォーカルアドヒージョンおよびRhoファミリーGTPアーゼ経路に関連する下流シグナルを介して、細胞移動、接着、創傷に伴う運動性、細胞骨格の組織化などの過程に影響を与える。アクチン依存的なトラフィッキングや細胞ストレス応答を形作ることで、Tmsb4xは炎症、組織リモデリング、血管新生プログラム、線維化の進行といった文脈で研究されてきた。Tβ-4活性の変化に伴うアクチン動態の破綻は、がん生物学や免疫細胞機能に関わる増殖・遊走形質に影響しうる。

Tβ-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTmsb4x遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tmsb4x内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tmsb4xのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tβ-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tβ-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tmsb4x欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tβ-4の機能に不可欠なTmsb4xエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tmsb4xゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tβ-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTβ-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tmsb4x遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tβ-4 HDRプラスミド（m）および Tβ-4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTmsb4xホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTmsb4x標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。