Plasmide Double Nickase (h) T-bet/TBX21: sc-400480-NIC

TBX21 code T-bet, un facteur de transcription de la famille T-box qui orchestre les programmes immunitaires de type 1 en favorisant l'expression d'IFNG et en renforçant l'engagement de la lignée Th1, tout en antagonisant d'autres destinées des lymphocytes T auxiliaires. T-bet intègre des signaux en aval des voies des cytokines et des récepteurs antigéniques, notamment IL-12/STAT4 et IFN-γ/STAT1, afin de modeler l'accessibilité de la chromatine et les réseaux transcriptionnels dans les lymphocytes T CD4+ et CD8+ ainsi que dans les cellules NK. En contrôlant la différenciation effectrice, la fonction cytotoxique et l'équilibre des cytokines inflammatoires, TBX21 est largement étudié dans les contextes d'infections chroniques, d'immunobiologie tumorale et de maladies inflammatoires à médiation immunitaire. Une activité ou une expression dérégulée de TBX21 a été associée à une polarisation immunitaire aberrante et à une inflammation tissulaire modifiée, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire.

T-bet/TBX21 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TBX21 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TBX21. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TBX21. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TBX21.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.