Syntaxin 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403466-ACT

STX3 codifica a sintaxina 3, uma t-SNARE localizada na membrana plasmática que medeia o ancoramento de vesículas e a fusão de membranas durante a exocitose polarizada. A sintaxina 3 atua em conjunto com proteínas da família SNAP e VAMPs para regular o tráfego apical em células epiteliais e a entrega direcionada de cargas em neurônios e células imunes, influenciando a reciclagem de proteínas de membrana e a secreção. Por meio do seu papel na triagem endossomal e em vias exocíticas, STX3 contribui para a manutenção da polaridade celular, da organização juncional e da função de barreira. A desregulação do tráfego dependente de SNARE envolvendo STX3 tem sido implicada em distúrbios da polaridade epitelial e da função neural, sustentando seu estudo em vias relevantes para a organização celular e para fenótipos de transporte associados a doenças.

Syntaxin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Syntaxin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Syntaxin 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Syntaxin 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Syntaxin 3 em células tumorais com expressão de STX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.