Syntaxin 17 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403251-NIC

STX17 codifica a Syntaxin 17, uma SNARE ancorada no RE (retículo endoplasmático) que se localiza em membranas associadas às mitocôndrias e em autofagossomos, onde medeia etapas tardias da autofagia ao promover a fusão entre autofagossomo e lisossomo. Por meio de interações com SNAP29 e VAMP8, a STX17 sustenta o fluxo autofágico, o controle de qualidade de organelas e a adaptação celular ao estresse por privação de nutrientes, com efeitos a jusante sobre a homeostase mitocondrial e a sinalização imune inata. A perturbação do tráfego e da autofagia dependentes de STX17 tem sido associada a mitofagia alterada e a desequilíbrio da proteostase, processos relevantes para neurodegeneração, tolerância ao estresse em células cancerosas e fenótipos inflamatórios. Como um nó na interface entre fusão de membranas e autofagia seletiva, a STX17 é frequentemente estudada em vias que regulam a função lisossomal, a renovação mitocondrial e a sobrevivência celular sob estresse.

Syntaxin 17 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus STX17 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de STX17. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função STX17. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com STX17 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.