Plasmide CRISPR d'Activation (h) Syntaxin 11: sc-404809-ACT

STX11 code la syntaxine 11, une protéine t‑SNARE qui régule l’amarrage des vésicules et les événements de fusion membranaire, essentiels à l’exocytose régulée et au trafic endosomal. Dans les cellules immunitaires, la syntaxine 11 favorise la libération des granules cytotoxiques et contribue à une dynamique coordonnée des lysosomes sécrétoires qui façonne les réponses antivirales et antitumorales. Une perturbation de la fusion membranaire dépendante de STX11 dérègle la maturation des granules et les voies de dégranulation, avec une pertinence documentée pour des phénotypes d’immunodéficience primaire impliquant une cytotoxicité lymphocytaire déficiente. En tant que composant des réseaux de trafic médiés par les SNARE, la syntaxine 11 est également utilisée pour étudier l’identité des organites, l’arrimage des vésicules et l’acheminement du cargo dans des contextes hématopoïétiques et inflammatoires.

Syntaxin 11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STX11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Syntaxin 11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STX11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STX11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Syntaxin 11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STX11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Syntaxin 11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Syntaxin 11 dans les cellules tumorales présentant une expression de STX11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.