Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423246

概要

Syt4は、シナプトタグミンファミリーの非典型的メンバーであるシナプトタグミンIVをコードしており、神経細胞および神経内分泌細胞における活動依存的な小胞輸送とエキソサイトーシスの制御に関与するとされています。典型的なCa2+センサーとは異なり、シナプトタグミンIVはシナプス小胞サイクル、神経伝達物質放出確率、ならびにシナプス前可塑性を調節し、膜動態を神経活動プログラムと結び付けます。Syt4の機能は、SNARE依存的な融合装置、エンド／エキソサイトーシスに伴う膜リサイクリング、そして回路レベルの適応を形作るカルシウム依存性シグナル伝達経路と交差しています。SYT4の発現や機能の破綻は、シナプス可塑性の異常表現型と関連することが報告されており、神経発達および神経精神疾患に関わる機序の文脈で研究されています。

Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSyt4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Syt4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Syt4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synaptotagmin IVタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synaptotagmin IVシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Syt4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synaptotagmin IVの機能に不可欠なSyt4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Syt4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSynaptotagmin IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Syt4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synaptotagmin IV HDRプラスミド（m）および Synaptotagmin IV HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSyt4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSyt4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。