Synaptotagmin II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423244
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Synaptotagmin II O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Synaptotagmin II, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Synaptotagmin II Anticorpo (26): sc-136089
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Synaptotagmin II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423244 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Syt2 codifica a sinaptotagmina II, uma proteína de membrana ligante de Ca2+ que atua como um sensor rápido essencial de Ca2+ para a exocitose de vesículas sinápticas e a liberação síncrona de neurotransmissores. Por meio de seus domínios C2, a sinaptotagmina II acopla o influxo de Ca2+ evocado pelo potencial de ação à fusão de membrana dependente de SNAREs, modulando a probabilidade de liberação pré-sináptica e a plasticidade de curto prazo. Em neurônios e junções neuromusculares de camundongos, a expressão de Syt2 está intimamente associada à transmissão rápida em circuitos definidos e vias motoras. A desregulação da fusão vesicular desencadeada por Ca2+ e de mecanismos de liberação pré-sináptica é amplamente relevante para estudos de neurofisiologia e de mecanismos de doenças neurológicas, nos quais a disfunção sináptica é uma característica central.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin II (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Syt2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Syt2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Syt2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Synaptotagmin II.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Syt2 para a investigação da sinalização de Synaptotagmin II, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Syt2 críticos para a função Synaptotagmin II
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Syt2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Synaptotagmin II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Synaptotagmin II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Syt2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Synaptotagmin II Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Synaptotagmin II (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Syt2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Syt2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.