SV2C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402877-ACT

シナプス小胞糖タンパク質2C（SV2C）は、シナプス小胞および関連する分泌コンパートメントに局在する多回膜貫通タンパク質であり、小胞輸送、プライミング、ならびに刺激に連動した神経伝達物質放出の制御に寄与します。神経細胞では、SV2ファミリータンパク質がエキソサイトーシスの中核機構と相互作用し、シナプス小胞サイクリングと神経伝達の効率に影響を与えることで、回路レベルのシグナル伝達にも作用します。ヒトSV2Cはカテコールアミン作動性経路に豊富に発現し、ドーパミン作動性シナプス機能との関連が示されているため、神経細胞の脆弱性やシナプス機能不全の研究において重要です。SV2Cの発現や活性の変化は、遺伝学的・機能的データセットにおいて神経変性および神経精神疾患様の表現型と関連づけられており、シナプス生物学研究における機構解明の結節点としての有用性が支持されています。

SV2C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SV2Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SV2C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SV2C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSV2C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SV2Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSV2C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSV2C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSV2C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSV2C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。