Plasmide CRISPR/Cas9 KO Superoxide Dismutase 3/SOD3 (m): sc-423071

Présentation

Le gène murin *Sod3* code la superoxyde dismutase extracellulaire (SOD3), une enzyme sécrétée dépendante du cuivre et du zinc (Cu/Zn) qui catalyse la dismutation de l’anion superoxyde en peroxyde d’hydrogène et en oxygène, contribuant ainsi à l’homéostasie rédox dans la matrice extracellulaire et à la surface des cellules. En limitant les modifications oxydatives des lipides et des protéines et en préservant la biodisponibilité de l’oxyde nitrique, SOD3 influence la signalisation vasculaire, le recrutement des cellules inflammatoires et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une activité altérée de SOD3 est associée à des phénotypes induits par le stress oxydant pertinents pour la biologie cardiopulmonaire et vasculaire, notamment des processus tels que la dysfonction endothéliale, la fibrose et l’inflammation chronique. Ces caractéristiques font de *Sod3* un nœud clé pour étudier la gestion extracellulaire des ERO (ROS) et les réseaux de signalisation régulés par le rédox dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Superoxide Dismutase 3/SOD3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sod3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sod3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sod3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Superoxide Dismutase 3/SOD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sod3 pour l'étude de la signalisation de Superoxide Dismutase 3/SOD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sod3 essentiels à la fonction de Superoxide Dismutase 3/SOD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sod3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Superoxide Dismutase 3/SOD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Superoxide Dismutase 3/SOD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sod3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Superoxide Dismutase 3/SOD3 plasmide HDR (m) et le Superoxide Dismutase 3/SOD3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sod3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sod3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.