Superoxide Dismutase 2/SOD2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423070-ACT

Das murine Sod2 kodiert das mitochondriale antioxidative Enzym Superoxiddismutase 2 (SOD2), das die Umwandlung des Superoxid-Anions in Wasserstoffperoxid und Sauerstoff katalysiert und so die Redox-Homöostase aufrechterhält. Indem SOD2 die Anreicherung reaktiver Sauerstoffspezies in der mitochondrialen Matrix begrenzt, beeinflusst es die Integrität der oxidativen Phosphorylierung, die mitochondriale Dynamik und apoptosisbezogene Signalwege. Die Sod2-Aktivität steht in Wechselwirkung mit zellulären Stressantwort-Netzwerken, darunter NRF2-vermittelte antioxidative Programme, inflammatorische Signalwege und Pfade der metabolischen Anpassung. Eine dysregulierte SOD2-Expression oder -Aktivität wird häufig als mechanistischer Readout in Modellen mitochondrialer Dysfunktion, Neurodegeneration, kardiometabolischem Stress und entzündungsassoziierter Gewebeschädigung verwendet.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sod2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sod2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sod2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Superoxide Dismutase 2/SOD2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sod2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Superoxide Dismutase 2/SOD2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Superoxide Dismutase 2/SOD2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sod2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.