Plasmide Double Nickase (h) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-400186-NIC

SOD1 code la superoxyde dismutase cytosolique Cu/Zn, qui catalyse la dismutation des radicaux superoxyde en peroxyde d'hydrogène et en oxygène, constituant une première ligne de défense contre le stress oxydant. En contrôlant les flux d'espèces réactives de l'oxygène, SOD1 influence l'homéostasie rédox, la fonction mitochondriale et les voies de signalisation en aval qui relient la charge oxydative à l'inflammation, à la protéostasie et aux programmes de survie cellulaire. Une activité ou une stabilité dérégulée de SOD1 est associée à une capacité antioxydante altérée et à des états propices à l'agrégation qui perturbent la biologie des motoneurones et des cellules gliales. De ce fait, SOD1 est largement étudiée dans la neurodégénérescence, le remodelage métabolique sensible au rédox et les réseaux de réponse cellulaire au stress.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SOD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SOD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SOD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SOD1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.