Plasmide CRISPR d'Activation (m) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-423069-ACT

Le gène murin **Sod1** code la superoxyde dismutase 1 (SOD1), une métalloprotéine Cu/Zn principalement cytosolique qui catalyse la dismutation de l’anion superoxyde en peroxyde d’hydrogène et en oxygène, limitant ainsi les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et aux acides nucléiques. En modulant l’homéostasie redox cellulaire, SOD1 influence la fonction mitochondriale, l’équilibre des réseaux antioxydants (p. ex. la prise en charge des peroxydes dépendante des peroxyrédoxines et de la catalase) et des voies de signalisation sensibles au stress, notamment MAPK et NF-κB. Une perturbation de l’activité de SOD1 modifie les flux d’espèces réactives de l’oxygène et peut affecter la protéostase, la neuroinflammation et la survie cellulaire en conditions de stress oxydatif. La biologie de SOD1 est largement étudiée dans le contexte de la dérégulation redox et des modèles de neurodégénérescence, ainsi que de phénotypes plus généraux associés au stress oxydatif dans le métabolisme et le vieillissement.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sod1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sod1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sod1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Superoxide Dismutase 1/SOD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sod1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Superoxide Dismutase 1/SOD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Superoxide Dismutase 1/SOD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sod1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.