Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423069-ACT

Il gene Sod1 del topo codifica la superossido dismutasi 1 (SOD1), un metalloenzima Cu/Zn prevalentemente citosolico che catalizza la dismutazione dell’anione superossido in perossido di idrogeno e ossigeno, limitando così il danno ossidativo a proteine, lipidi e acidi nucleici. Modellando l’omeostasi redox cellulare, SOD1 influenza la funzione mitocondriale, l’equilibrio della rete antiossidante (ad es. la gestione dei perossidi dipendente da perossiredossine e catalasi) e vie di segnalazione responsiva allo stress, incluse MAPK e NF-κB. Alterazioni dell’attività di SOD1 modificano il flusso delle specie reattive dell’ossigeno e possono incidere sulla proteostasi, sulla neuroinfiammazione e sulla sopravvivenza cellulare in condizioni di stress ossidativo. La biologia di SOD1 è ampiamente studiata nel contesto della disregolazione redox e in modelli di neurodegenerazione, oltre che in fenotipi più ampi associati allo stress ossidativo in metabolismo e invecchiamento.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sod1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sod1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sod1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Superoxide Dismutase 1/SOD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sod1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Superoxide Dismutase 1/SOD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Superoxide Dismutase 1/SOD1 nelle cellule tumorali con espressione di Sod1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.