SUMO-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423045-ACT

O gene **Sumo3** do camundongo codifica a **SUMO-3**, um modificador do tipo ubiquitina que é conjugado covalentemente a resíduos de lisina em proteínas-alvo para regular sua estabilidade, localização e atividade. A SUMOilação coordena o controle dinâmico da transcrição, do reparo de danos ao DNA, da organização da cromatina e da progressão do ciclo celular por meio da rede de ligases E1 (SAE1/SAE2), E2 (UBC9) e E3, e é revertida por proteases SENP. A SUMO-3 participa da sinalização responsiva ao estresse e da proteostase ao modular a montagem de corpos nucleares e redes de interações proteína–proteína. A desregulação da conjugação de SUMO tem sido associada na literatura a alterações na sinalização inflamatória, ao estresse proteotóxico ligado à neurodegeneração e a programas transcricionais oncogênicos, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de biologia de doenças.

SUMO-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sumo3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SUMO-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sumo3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sumo3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SUMO-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sumo3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SUMO-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SUMO-3 em células tumorais com expressão de Sumo3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.