SUMO-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401111-ACT

O gene humano **SUMO2** codifica a **SUMO-2**, um modificador semelhante à ubiquitina que é conjugado covalentemente a proteínas-alvo num ciclo dinâmico de modificação pós-traducional que regula a estabilidade proteica, a localização subcelular e a montagem de complexos macromoleculares. A SUMOilação dependente de SUMO-2 influencia a sinalização e a reparação de danos no DNA, a organização da cromatina, o controlo transcricional e a progressão do ciclo celular por meio de cascatas enzimáticas SUMO E1/E2/E3 e de desSUMOilação coordenada por proteases SENP. A SUMO-2 pode formar cadeias de poli-SUMO que interagem com ligases de ubiquitina direcionadas por SUMO, ligando a SUMOilação à proteostase e a respostas adaptativas ao stress. A atividade desregulada de SUMO2 e padrões alterados de SUMOilação são frequentemente estudados em contextos de sinalização oncogénica, neurodegeneração e stress inflamatório, nos quais estão implicadas alterações em rede na transcrição e na manutenção do genoma.

SUMO-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SUMO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SUMO-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SUMO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SUMO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SUMO-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SUMO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SUMO-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SUMO-2 em células tumorais com expressão de SUMO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.