SUMO-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417721-ACT

O gene SUMO1 humano codifica a SUMO-1, um modificador semelhante à ubiquitina que é conjugado covalentemente a proteínas-alvo para regular a estabilidade, a localização e as interações proteína–proteína. A SUMOilação é central para o transporte nuclear, a organização da cromatina, o controle transcricional, a sinalização de dano ao DNA e a progressão do ciclo celular, coordenando respostas adaptativas ao estresse e a proteostase. Por meio de uma interação dinâmica com a ubiquitinação e a fosforilação, a SUMO-1 influencia vias como a sinalização de NF-κB, checkpoints mediados por p53 e o reparo associado à replicação. A desregulação da SUMOilação tem sido associada a programas transcricionais oncogênicos, agregação proteica neurodegenerativa e sinalização imune alterada, tornando o SUMO1 um ponto útil para estudos mecanísticos de estresse celular e manutenção do genoma.

SUMO-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SUMO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SUMO-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SUMO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SUMO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SUMO-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SUMO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SUMO-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SUMO-1 em células tumorais com expressão de SUMO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.