STK33 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404127-ACT

STK33 (quinase de serina/treonina 33) é uma quinase proteica humana implicada na regulação de redes de sinalização intracelular que influenciam a sobrevivência celular, a proliferação e a organização do citoesqueleto. Como uma putativa quinase de serina/treonina, a STK33 tem sido investigada no contexto de dependências de sinalização oncogênica e de vias de resposta ao estresse, nas quais alterações na atividade da quinase podem remodelar programas de fosforilação a jusante. A expressão ou função desregulada de STK33 tem sido associada a fenótipos relevantes para o câncer em sistemas modelo, incluindo mudanças no controle de crescimento e na sensibilidade à apoptose. Essas propriedades tornam a STK33 um alvo útil para estudar o remodelamento de vias impulsionado por quinases e a função gênica dependente do contexto em pesquisa biomédica.

STK33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STK33 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

STK33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STK33 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STK33, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de STK33. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STK33 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de STK33 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via STK33 em células tumorais com expressão de STK33 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.