Stim2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431161

概要

Stim2（stromal interaction molecule 2）は小胞体（ER）のCa2+センサーであり、ER内Ca2+ストアの枯渇を、ER–細胞膜ジャンクションにおけるOraiチャネル活性の制御を介してストア作動性カルシウム流入（SOCE）へと結び付けます。マウス細胞では、STIM2は細胞質内の基礎Ca2+濃度の維持に寄与し、NFAT依存性転写、シナプス機能、免疫細胞の活性化プログラムに影響するCa2+依存性シグナル伝達の振幅と持続時間を調整します。これらのカルシウムシグナル伝達ネットワークを通じて、Stim2は神経の興奮性と可塑性、サイトカイン応答、細胞ストレスへの適応などの過程に関連付けられています。SOCEおよびSTIM2依存性シグナルの異常は、神経炎症、自己免疫、細胞生存経路の変調といった疾患関連メカニズムへの関与が示唆されており、Stim2は機構解明研究に有用な標的となります。

Stim2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStim2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Stim2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Stim2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Stim2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Stim2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Stim2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Stim2の機能に不可欠なStim2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Stim2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Stim2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびStim2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Stim2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Stim2 HDRプラスミド（m）および Stim2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStim2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStim2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。