St3Gal-III Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406298-LAC

ST3GAL3 codifica la sialiltransferasi St3Gal-III residente nel Golgi, che catalizza l’aggiunta di acido sialico con legame α2,3 al galattosio su glicoproteine e glicolipidi, plasmando le strutture glicani terminali sulla superficie cellulare e sulle proteine secrete. Controllando i pattern di sialilazione, St3Gal-III influenza la maturazione delle glicoproteine, la stabilità dei recettori e le interazioni mediate da lectine che incidono su segnalazione cellulare, adesione e riconoscimento immunitario. L’attività di ST3GAL3 contribuisce a vie più ampie di glicosilazione che regolano il traffico lungo la via secretoria e il rimodellamento del glicocalice. Varianti genetiche o una disregolazione di ST3GAL3 sono state associate a fenotipi del neurosviluppo e a firme del glicoma alterate, rilevanti per la funzione neuronale e per cambiamenti legati alla malattia nella comunicazione cellula–cellula.

Le particelle di attivazione lentivirale St3Gal-III (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ST3GAL3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale St3Gal-III (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ST3GAL3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di St3Gal-III. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ST3GAL3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.