SREBP-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400575-ACT

SREBF2は、ステロール調節エレメント結合タンパク質2（SREBP-2）をコードしており、SREBP-2は膜結合型の転写因子です。細胞内ステロールが低下すると、SREBP-2はプロテアーゼによる切断を受けて活性化し、コレステロール生合成および取り込みを制御する遺伝子群の発現を誘導します。SREBP-2はSCAPやINSIGタンパク質と協調して、メバロン酸経路やLDL受容体を介したコレステロール取り込みを調節し、脂質恒常性を小胞体（ER）ストレスや代謝シグナルと統合して制御します。SREBF2/SREBP-2活性の変化は脂質異常症やメタボリックシンドローム関連表現型に関与するとされ、さらに病態環境において増殖や炎症シグナルを支える脂質リプログラミング（代謝再配線）とも関連づけられています。ステロール感知と転写制御の中核ノードとして、SREBF2は代謝制御、膜組成、ならびにオートファジーや自然免疫経路とのクロストークにおける役割の観点から広く研究されています。

SREBP-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SREBF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SREBP-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SREBF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSREBF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SREBP-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSREBF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSREBP-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSREBF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSREBP-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。