Plasmide CRISPR/Cas9 KO SREBP-1 (m): sc-423152

Présentation

Srebf1 code la protéine 1 de liaison aux éléments régulateurs des stérols (SREBP-1), un facteur de transcription ancré à la membrane qui est activé par protéolyse pour contrôler des programmes du métabolisme des lipides et des glucides. Dans les cellules de souris, SREBP-1 induit l’expression des enzymes nécessaires à la synthèse de novo des acides gras et des triglycérides, et relie les signaux nutritionnels et hormonaux aux réseaux de gènes lipogéniques via une régulation transcriptionnelle dépendante de SREBP. Cette voie s’intègre aux signalisations de l’insuline et de mTOR, à l’homéostasie du réticulum endoplasmique (RE) et à la biogenèse membranaire, influençant l’adipogenèse et le remodelage métabolique des hépatocytes. Une activité dérégulée de SREBP-1 est largement utilisée comme axe mécanistique dans des modèles de stéatose hépatique, de résistance à l’insuline associée à l’obésité et d’inflammation induite par les lipides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SREBP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Srebf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Srebf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Srebf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SREBP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Srebf1 pour l'étude de la signalisation de SREBP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Srebf1 essentiels à la fonction de SREBP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Srebf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SREBP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SREBP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Srebf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SREBP-1 plasmide HDR (m) et le SREBP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Srebf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Srebf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.