SR-3A Double Nickaseプラスミド (h): sc-402999-NIC

HTR3Aは、ヒトの5-ヒドロキシトリプタミン（セロトニン）受容体3A（SR-3A）をコードする。SR-3AはCysループ受容体ファミリーに属するリガンド作動性イオンチャネルであり、同一サブユニットからなるホモ五量体、または他のサブユニットと組み合わさったヘテロ五量体として5-HT3受容体を形成する。セロトニンが結合すると、SR-3Aは迅速な陽イオン流入を介して膜の脱分極、カルシウム依存性シグナル伝達、神経伝達物質放出を調節し、セロトニン作動性トーンをシナプス伝達および神経免疫コミュニケーションに結び付ける。HTR3Aの活性は、イオン恒常性の変化を通じて神経細胞の興奮性を制御する経路や、その下流にあるMAPK/ERKおよびcAMP応答性の転写プログラムとも交差する。5-HT3シグナル伝達の異常は神経精神疾患および消化器系の表現型と関連づけられており、脳—腸相関の生物学や刺激誘発性の細胞応答におけるHTR3Aの検討を支持している。

SR-3A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HTR3A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HTR3A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HTR3Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HTR3Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。