SPTLC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402829-ACT

O SPTLC1 codifica uma subunidade catalítica da serina palmitoiltransferase, a enzima limitante da velocidade na biossíntese *de novo* de esfingolipídios, que condensa serina com palmitoil-CoA para gerar 3-cetoesfinganina. Por meio do controle da produção de ceramida, esfingomielina e glicoesfingolipídios complexos, o SPTLC1 influencia a composição de membranas, a sinalização em *lipid rafts*, a autofagia e vias de resposta ao estresse, incluindo a homeostase do retículo endoplasmático (RE). Alterações na atividade do SPTLC1 perturbam os perfis de esfingolipídios e têm sido associadas a fenótipos de neurodegeneração e neuropatia periférica, bem como a uma desregulação metabólica mais ampla. Como um nó central no metabolismo lipídico, o SPTLC1 é amplamente estudado por seu impacto na sinalização celular, na função de organelas e em processos inflamatórios mediados por lipídios.

SPTLC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPTLC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SPTLC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPTLC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPTLC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SPTLC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPTLC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SPTLC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SPTLC1 em células tumorais com expressão de SPTLC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.