SPA-L3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411666-ACT

ヒトのSIPA1L3はSPA-L3をコードしており、SPA-L3は多ドメインからなるシグナル伝達スキャフォールドとして、小型GTPアーゼの制御ネットワークと相互作用し、細胞膜および細胞皮質細胞骨格におけるタンパク質複合体の形成・配置を組織化します。Rap/Ras経路の構成要素やアクチン連結複合体との関連を通じて、SPA-L3は細胞極性、接着、ならびに移動や形態形成を規定する細胞骨格の動的リモデリングに影響を与え得る位置づけにあります。これらの過程の制御異常は、しばしば浸潤性の挙動や異常な組織構築に関与するため、SIPA1L3は疾患関連の細胞状態における経路の再配線を研究するうえで有用な遺伝子座となります。そのため、SIPA1L3の発現量およびネットワーク結合性は、膜近傍シグナル伝達、細胞骨格制御、表現型可塑性を検討するモデルにおいて有益な指標となります。

SPA-L3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIPA1L3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPA-L3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIPA1L3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIPA1L3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPA-L3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIPA1L3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPA-L3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIPA1L3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPA-L3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。