SOAT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409713-ACT

A SOAT2 humana (sterol O-aciltransferase 2), também conhecida como ACAT2, é uma enzima localizada no retículo endoplasmático que catalisa a esterificação do colesterol com acil-CoA de ácidos graxos de cadeia longa para formar ésteres de colesterol. Essa reação sustenta o armazenamento intracelular de colesterol, a biogênese de gotículas lipídicas e a montagem de lipoproteínas, conectando a atividade da SOAT2 à homeostase de esteróis e a redes mais amplas do metabolismo lipídico. A SOAT2 atua na interface entre o tráfego de colesterol, a absorção intestinal e o processamento lipídico hepático, influenciando vias que regulam a composição de membranas e o tamponamento de lipídios neutros. A desregulação do metabolismo de ésteres de colesterol e alterações na expressão de SOAT2 têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças metabólicas e cardiovasculares, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de estresse e remodelamento celular induzidos por lipídios.

SOAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOAT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SOAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOAT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOAT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SOAT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOAT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SOAT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SOAT2 em células tumorais com expressão de SOAT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.