SNX3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404028-NIC

SNX3（sorting nexin 3）はPXドメインをもつソーティングネキシンで、初期エンドソーム上のホスファチジルイノシトール3-リン酸に結合し、エンドソーム系におけるカーゴの選別を組織化するのに寄与します。SNX3はレトロマー関連トラフィッキングの主要構成因子であり、エンドソームからゴルジ体への回収輸送や膜タンパク質の制御されたリサイクリングを支えることで、受容体の利用可能性や下流のシグナル伝達を形作ります。膜リモデリングとカーゴ選択における役割を通じて、SNX3は栄養取り込み、シグナルの減衰、細胞極性の維持といった過程に影響します。SNX3およびレトロマー機能に関わるエンドソーム輸送経路の破綻は、神経変性、病原体侵入、ならびに複数の疾患モデルで観察される受容体シグナル異常の文脈でしばしば検討されています。

SNX3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SNX3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SNX3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SNX3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SNX3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。