SNX3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404028-ACT

SNX3 (sorting nexin 3) é um fator de tráfego endossomal que contém um domínio PX, liga-se ao fosfatidilinositol 3-fosfato e ajuda a organizar a dinâmica da membrana dos endossomos precoces. Atua em conjunto com o complexo retromer para promover a reciclagem do endossomo para a rede trans-Golgi e para regular a triagem de recetores e transportadores da membrana plasmática, influenciando a amplitude da sinalização e a homeostase da membrana. Por meio das suas funções na recuperação de carga e na reciclagem endocítica, o SNX3 afeta vias ligadas à secreção de WNT e ao tráfego de recetores, bem como processos mais amplos adjacentes a lisossomas e à autofagia. A desregulação da triagem endossomal e do transporte associado ao retromer está implicada na neurodegeneração, na biologia do cancro e em fenótipos metabólicos, tornando o SNX3 um nó útil para estudos mecanísticos de sinalização dependente de tráfego.

SNX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNX3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNX3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNX3 em células tumorais com expressão de SNX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.