SNX27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403237-ACT

SNX27 (sorting nexin 27) é um adaptador endossomal contendo um domínio PX que acopla o reconhecimento de fosfoinositídeos de membrana à reciclagem de cargas, principalmente por meio da interação do seu domínio PDZ com motivos de ligação a PDZ em proteínas transmembrana. Ao se associar aos complexos retromer e WASH, o SNX27 ajuda a coordenar o tráfego do endossomo para a membrana plasmática e a tubulação dependente de actina, moldando a disponibilidade de receptores e a sinalização a jusante. Esses processos influenciam a homeostase de receptores sinápticos, a reciclagem de transportadores de nutrientes e a manutenção da polaridade epitelial, ligando o SNX27 a vias que controlam a amplitude da sinalização celular e a proteostase de membrana. Alterações na expressão ou na função de SNX27 têm sido implicadas em fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos e em desregulação do tráfego de receptores observada em diversos contextos celulares relevantes para doenças.

SNX27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNX27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNX27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNX27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNX27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNX27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNX27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNX27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNX27 em células tumorais com expressão de SNX27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.