SNX17 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403452-ACT

SNX17（sorting nexin 17）はPXドメインを有するエンドソームアダプターで、ホスホイノシチドに結合し、NPxYモチーフを認識して、多様な膜タンパク質のエンドサイトーシス後のリサイクリングを制御します。Retriever/CCC複合体やレトロマー関連の輸送機構との相互作用を介して、SNX17は初期エンドソームから形質膜への受容体の選別・回収を支え、その結果、シグナル伝達の出力、栄養取り込み、細胞—細胞外マトリックス間のコミュニケーションを形作ります。LDL受容体ファミリーやインテグリンなどのカーゴの細胞表面での利用可能性を調節することで、SNX17は脂質恒常性、細胞移動、細胞骨格の組織化に関連する経路に影響を与えます。SNX17依存的なトラフィッキングの破綻は受容体シグナルの変化と関連づけられており、代謝表現型、神経生物学、がんに関連した細胞挙動などの文脈で研究されています。

SNX17 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNX17の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SNX17 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNX17 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNX17転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SNX17の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNX17遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSNX17依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNX17発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSNX17経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。