Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNX17: sc-403452-ACT

SNX17 (sorting nexin 17) est un adaptateur endosomal contenant un domaine PX, capable de se lier aux phosphoinositides et de reconnaître les motifs NPxY afin de contrôler le recyclage endocytique de diverses protéines membranaires. Grâce à ses interactions avec les complexes Retriever/CCC et la machinerie de trafic associée au rétromère, SNX17 favorise le tri des récepteurs depuis les endosomes précoces vers la membrane plasmique, modulant ainsi l’intensité des signaux, l’absorption de nutriments et la communication cellule–matrice. En régulant la disponibilité en surface de cargaisons telles que les membres de la famille des récepteurs LDL et les intégrines, SNX17 influence des voies liées à l’homéostasie lipidique, à la migration et à l’organisation du cytosquelette. Un trafic dépendant de SNX17 dérégulé a été associé à une altération de la signalisation des récepteurs et a été étudié dans des contextes incluant des phénotypes métaboliques, la neurobiologie et des comportements cellulaires liés au cancer.

SNX17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNX17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNX17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNX17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNX17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNX17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNX17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNX17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNX17 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNX17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.